FDNB是2,4二硝基氟苯；FDNB法是反应中氨基酸的氨基发生烃基化反应，应用于蛋白质一级结构的测定；FDNB与蛋白质在室温，酸碱度在8至9，在适当条件下反应，生成DNP蛋白；随之，在105摄氏度，6摩尔每升的盐酸条件下水解，生成DNP氨基酸及其它游离氨基酸；由于DNP氨基酸溶于乙醚，而其余氨基酸不溶，故用乙醚抽提出DNP氨基酸，再将未知样的DNP氨基酸与已知标准DNP氨基酸在相同条件下进行纸层析，根据比移值即可推断未知样N末端为何种氨基酸。
生物化学应用题
分析：FDNB即2，4-二硝基氟苯，在弱碱性溶液中可与肽链N-末端的氨基酸生成黄色的二硝基苯氨基酸（DNP-AA）。盐酸水解可以打开所有的肽链，是蛋白质或者多肽变为游离的氨基酸。LiBH4还原羧酸成为醇类，可使C-末端AA还原为相应的氨基醇。胰蛋白酶可专一性水解由碱性氨基酸（lys，Arg）羧基端形成的肽键。
解题：1.因为FDNB反应后经5.7mol/LHCl水解得到DNP-Val及3种其他氨基酸，所以N-末端是Val。解出：Val·-·-·-。
2.其中一片用LiBH4还原后再进行酸水解,水解液内有氨基乙醇，Gly是氨基乙酸，因此C-末端是Gly。浓硫酸条件下能与乙醛酸反应产生紫(红)色产物的氨基酸是Trp。解出：Val·-·Trp·Gly
3.当这4肽用胰蛋白酶水解时发现有两种碎片段，所以水解此肽键-COOH末端是Lys或者Arg。解出：Val·Lys·Trp·Gly或者Val·Arg·Trp·Gly
答案：Val-Lys或Arg-Trp-Gly
蛋白质N端和C端的测定方法是什么？基本原理是什么？
(1)N-末端测定
A.二硝基氟苯法(FDNB,DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。
DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸。
B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法,步骤如下：
由于乙内酰脲氨基酸不带电荷，因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开，分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解，重新生成游离的氨基酸，鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸。
C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法，采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯,简称丹磺酰氯。它与游离氨基末端作用，方法类似于Sanger的DNFB法，产物是磺酰胺衍生物。
丹磺酰链酸具有强烈的黄色荧光。此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍，样品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高)，可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定。
(2)C-末端分析
A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法。将多肽溶于无水肼中，100℃下进行反应，结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放，而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼。
这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析。如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺，则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸。此外肼解时注意避免任何少量的水解，以免释出的氨基酸混淆末端分析。
B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶A、B和C。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。
这是生物化学的一道题目，
其氨基酸组成为：Glul，Serl，Glyl，Alal，Metl，Phel和Lys2，
从N到C方向。
a）FDNA与之反应再酸水解后得DNP-Ala
N端为Ala
b）胰凝乳蛋白酶（CT）消化后，从产物中分出一个纯四肽，其组成为：Glul，Glyl，Lysl，Metl
胰凝乳蛋白酶 作用水解由芳香氨基酸羧基形成的肽键，只有一个Phe是芳香族氨基酸，所以该四肽是前四个，或者后四个。
此四肽的FDNB反应降解产物为DNP-Gly, 所以四肽N端为Gly
Ala-?-?-Phe-Gly-?-?-? ,
c）胰蛋白酶（T）消化八肽后又可得到组成分别为Lysl，Alal，Serl及Phel，Lysl，Glyl的两个三肽及一个二肽。
二肽组成为 Met,Glu 是（b）中四肽的组成部分，所以只能是端位的两个氨基酸。
又因为其中一个三肽组成是Phe，Lys，Gly，胰蛋白酶水解碱性氨基酸的羧基形成的肽键，即切断Lys,Arg羧基形成的肽键，结合四肽组成，
可得 Ala-Ser-Lys-Gly-Phe-Lys-?-?
最后，此二肽被CNBr处理后游离出自由Glu。
CNBr 水解甲硫氨酸Met的羧基端，得Glu, 所以 最后一个氨基酸是Glu.
得 Ala-Ser-Lys-Gly-Phe-Lys-Met-Glu
sanger 求蛋白质测序法的原理，越详细越好！
sanger 法是指 用二硝基氟苯(DNFP)与多肽链上的 N端 氨基酸 的氨基反应 生成DNP-氨基酸 在酸性条件下水解 多肽链, DNP-氨基酸断裂下来,其余的是多肽链,然后通过纸层析DNP-氨基酸,确定是那种氨基酸.(当然某些氨基酸中的R基上氨基和羟基也可与 DNFP反应,但可通过有机溶剂除去).
ps 1953年 英国人sanger用测定了牛胰岛素的氨基酸序列,闻名于世.
生物化学中什么叫桑格反应？名词解释！
桑格反应（Sanger reaction）,此反应又称氨基酸与2,4-二硝基氟苯的反应 .
在弱碱性（pH 8~9）、暗处、室温或40℃条件下，氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯（缩写为FDNB）反应，生成黄色的2,4-二硝基氨基酸（dinitrophenyl amino acid，简称DNP-氨基酸）。该反应由F. Sanger首先发现。
多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应，生成一种二硝基苯肽（DNP-肽）。由于硝基苯与氨基结合牢固，不易被水解，因此当DNP-多肽被酸水解时，所有肽键均被水解，只有N-末端氨基酸仍连在DNP上，所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯，所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析，再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。
详细解答过程，生物化学
解：1、N-末端分析：FDNB法得：Asp-；
2、C-末端分析：羧肽酶法得：-Val；
3、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键，得到的是以Arg和Lys为C-末端残基的肽断。酸水解使Asn→Asp+ NH4+，由已知条件（Lys、Asp、Glu、Ala、Tyr）可得：Asn-( )-( )-( )-Lys-( )-( )-Val；
4、FDNB法分析N-末端得DNP-His，酸水解使Gln→Glu+NH4+由已知条件（His、Glu、Val）可得：Asn-( )-( )-( )-Lys-His-Gln-Val；
5、糜蛋白酶断裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。由题，得到的一条肽（Asp、Ala、Tyr）结合（3）、（4）可得该肽的氨基酸序列为：Asn-Ala-Tyr-Glu-Lys-His-Gln-Val
生物化学题目
先说下原理；
胰蛋白酶 ：
水解 赖氨酸 和 精氨酸 残基羧基所形成的肽键
若羧基端是脯氨酸则不能水解。
糜蛋白酶：水解 芳香环侧链的氨基酸残基 若羧基端是脯氨酸则不能水解。Phe Trp Tyr
解题：
因为与FDNB不发生反应，说明这个是一个环肽，没有游离的氨基末端
经糜蛋白酶作用后 得出：
（ala，ser）－tyr－（arg ，pro，lys）－phe
两个肽段分别与FDNB反应；得出：
ser－ala－tyr，
lys－（arg，pro）－phe
此肽与胰蛋白酶反应，得出
ser－ala－tyr，
lys－arg-pro-phe
整个多肽就是：
ser－ala－tyr－lys－arg-pro-phe
（ser和phe也是相连的，这是一个环肽）
这个题有答案吗？我觉得我做错了
可是步骤也没什么问题
一般考研不会考环肽的，太乱了。
生物化学肽链推断问题，求高手解答
单肽链用硼氢化锂还原后C-末端氨基酸被还原成相应的α-氨基醇。
还有一种是Lys或者Arg，因为胰蛋白酶识别位点是Lys或者Arg的羧基端肽键。
所以原来肽链的结构是
（N）Val-Lys（or Arg）-Trp-Gly（C）
Lys和Arg能不能排除其中一个我再想想。。。。
ms我想不出来有什么条件可以排除Lys或者Arg~~~
他为啥不用Edman降解捏？非要搞sanger法还要胰蛋白酶水解~浪费我感情啊~
蛋白质化学结构测定的基本原则是什么?
战略原则：将大化小，逐段分析，先后采用不同的方法制成两套肽片段，找出重叠的片段，排除肽段的前后位置，最后确定蛋白质的完整序列。
1。测定蛋白质中的氨基酸组成。
2。蛋白质N端和C端的测定。
3。应用两种或两种以上的水解方法将索要的蛋白质肽链断裂，各自得到一系列大小不同的肽段。
4。分裂提纯产生的肽，测定他们的序列。
5。从有重叠的各个肽的序列中推断出蛋白质全部氨基酸排列顺序。
普通生物化学试题
注意：请将答案写在答题纸上，否则无效；考试后试卷请交回监考教师处.
一、名词解释（每小题3分）
1.变旋现象2.蛋白质一级结构3.必需脂肪酸4.别构酶5.辅基
6.cAMP7.DNA变性8.尿素循环9.氧化磷酸化10.米氏常数
（本题20分）二、单项选择题（每小题1分）线
1．在生理pH条件下，下列哪种氨基酸带正电荷？（）A．丙氨酸B．酪氨酸C．赖氨酸D．蛋氨酸2.蛋白质的组成成分中，在280nm处有最大吸收值的最主要成分是：（）
A．酪氨酸的酚环B．半胱氨酸的硫原子C．色氨酸D．苯丙氨酸
3.持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是：（）
A．盐键B．疏水键C．氢键D．二硫键4.蛋白质变性是由于（）
A.一级结构改变B.空间构象破坏C.辅基脱落D.蛋白质水解
5.必需氨基酸是对（）而言的。
A.植物B.微生物C.动物和植物D.人和动物
6.下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的？（）A．蛋白质分子的净电荷为零时的pH值是它的等电点B．大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出
C．由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点
D．以上各项均不正确
7.决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是：（）
A．–XCCA3`末端B．TψC环；C．DHU环D．反密码子环
8.构成多核苷酸链骨架的关键是：（）
A．2′3′-磷酸二酯键B．2′4′-磷酸二酯键C．2′5′-磷酸二酯键D．3′5′-磷酸二酯键
9.下列化合物中哪个不含腺苷酸组分：（）
A．CoA
B．FMNC．FADD．NAD+
10.酶的竞争性可逆抑制剂可以使：（）
A．Vmax减小，Km减小B．Vmax增加，Km增加
C．Vmax不变，Km增加D．Vmax不变，Km减小
11.酶反应速度对底物浓度作图，当底物浓度达一定程度时，得到的是零级反应，对此最恰当的解释是：()
A.形变底物与酶产生不可逆结合B.酶与未形变底物形成复合物
C.酶的活性部位为底物所饱和D.过多底物与酶发生不利于催化反应的结合
12.如果质子不经过F1／F0-ATP合成酶回到线粒体基质，则会发生：()
A．氧化B．还原C．解偶联D．紧密偶联13.由己糖激酶催化的反应的逆反应所需要的酶是：()A．果糖二磷酸酶B．葡萄糖-6-磷酸酶C．磷酸果糖激酶D．磷酸化酶
14.在原核生物中，一摩尔葡萄糖经糖有氧氧化可产生ATP摩尔数：()
A．12B．24C．36D．38
15.脂肪酸活化后，β－氧化反复进行，不需要下列哪一种酶参与？（）
A.脂酰CoA合成酶B.β－羟脂酰CoA脱氢酶C.烯脂酰CoA水合酶D.硫激酶16.转氨酶的辅酶是：（）
A．NAD+B．NADP+
C．FADD．磷酸吡哆醛
17.参与尿素循环的氨基酸是：（）
A．组氨酸B．鸟氨酸C．蛋氨酸D．赖氨酸18.生物体内大多数氨基酸脱去氨基生成α-酮酸是通过下面那种作用完成的？（）
A.氧化脱氨基B.还原脱氨基C.联合脱氨基D.转氨基
19.分离鉴定氨基酸的纸层析属于（）
A.亲和层析B.吸附层析C.离子交换层析D.分配层析
20.进行酶活力测定时（）
A.底物浓度必须极大于酶浓度B.酶浓度必须极大于底物浓度
C.酶能提高反应的平衡点D.与底物浓度无关
（本题10分）三、判断题（每小题1分）
1．氨基酸与茚三酮反应都产生蓝紫色化合物。（）2.所有氨基酸都具有旋光性。（）
3.蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序在很大程度上决定了它的构象。（）
4.用FDNB法和Edman降解法测定蛋白质多肽链N-端氨基酸的原理是相同的。（）
5.具有四级结构的蛋白质，它的每个亚基单独存在时仍能保存蛋白质原有的生物活性。（）
6.DNA的Tm值随（A+T）/（G+C）比值的增加而减少。（）7.DNA复性（退火）一般在低于其Tm值约20℃的温度下进行的。（）
8.对于可逆反应而言，酶既可以改变正反应速度，也可以改变逆反应速度。（）
9.麦芽糖是由葡萄糖与果糖构成的双糖。（）
10.萌发的油料种子和某些微生物拥有乙醛酸循环途径，可利用脂肪酸α-氧化生成的乙酰CoA合成苹果酸，为糖异生和其它生物合成提供碳源。（）
注意：请将答案写在答题纸上，否则无效；考试后试卷请交回监
：号学
题答名姓要不内线封级密班业专《普通生物化学》试卷第2页
考教师处.（共3页）
(本题40分)四、问答（共5小题，合计40分）
1.根据蛋白质一级氨基酸序列可以预测蛋白质的空间结构。假设
有下列氨基酸序列（如图）：
151015202527
Pro-Asp-Gly-Met-Glu-Cys-Ala-Phe-His-Arg
密（1）预测在该序列的哪一部位可能会出弯或β-转角。（4分）
（2）何处可能形成链内二硫键？（2分）
（3）假设该序列只是大的球蛋白的一部分，下面氨基酸残基中哪
些可能分布在蛋白的外表面，哪些分布在内部？（4分）
天冬氨酸；异亮氨酸；苏氨酸；缬氨酸；谷氨酰胺；赖氨酸
2.简述tRNA二级结构的组成特点及其每一部分的功能。（5分）
3.对活细胞的实验测定表明，酶的底物浓度通常就在这种底物的
Km值附近，请解释其生理意义？为什么底物浓度不是大大高于
Km或大大低于Km呢？（5分）3页）封4.所谓糖异生途径中的能障是什么？代谢如何绕过之？（10分）
5.1mol硬脂酸完全氧化成CO2和H2O可生成多少molATP？（10分）
线
普通生物化学篇二：普通生物化学知识要点
课程代码：10118
一、单项选择题(本大题共15小题，每小题2分，共30分)
在每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。错选、多选或未选均无分。
1．最早提出细胞学说的两位科学家是（）
A.Shleiden、Schwann
C.Virchow、FlemmingB.Brown、PorkinjieD.Hertwig、Hooke
2．下列有关原核细胞的描述有误的是（）
A.原核细胞无内膜系统
C.原核细胞无核糖体B.原核细胞无细胞骨架D.原核细胞无细胞核
3．以下关于扫描电镜的描述不正确的是（）
A.分辨率为6-10nm
B.工作原理和光学显微镜相似，但采用电子束照明
C.镜筒内为真空环境
D.用来观察样品的表面结构
4．构成脑血屏障的细胞连接是（）
A.间隙连接
C.桥粒B.紧密连接D.粘着带
5．控制电压门通道开放与关闭的是（）
A.转运分子的浓度
C.膜电位的变化B.膜受体与配体的结合D.ATP能量的多少
6．动物小肠细胞对葡萄糖的吸收依靠（）
A.钠离子梯度驱动的同向协同
C.钾离子梯度驱动的同向协同B.钠离子梯度驱动的反向协同D.钾离子梯度驱动的反向协同
7．下列具有双层膜结构的.细胞器是（）
A.线粒体
C.高尔基复合体B.过氧化物酶体D.溶酶体
8．下列关于内质网蛋白的叙述有误的是（）
A.插入内质网膜成为跨膜蛋白
C.运输到高尔基体B.留在内质网D.运送到线粒体
第1页
9．FADH2电子传递链中与磷酸化相偶联部位的数目是（）
A.1个B.2个
C.3个D.4个
10．间期细胞核中结构疏松、染色浅的染色质是（）
A.结构异染色质B.功能异染色质
C.常染色质D.染色体
11．染色质的基本结构单位是（）
A.核糖体B.核小体
C.DNAD.组蛋白
12．粗肌丝和细肌丝的主要成分分别是（）
A.肌动蛋白和肌球蛋白B.肌球蛋白和肌动蛋白
C.微管蛋白和肌动蛋白D.肌球蛋白和微管蛋白
13．减数分裂中细胞DNA含量发生减半（相对于体细胞）的时期是（）
A.末期ⅡB.末期Ⅰ
C.后期ⅡD.后期Ⅰ
14．染色体分离分别由于何种微管解聚缩短和何种微管在微管动力蛋白参与下滑动延长？
（
A.均为极性微管B.均为动粒微管
C.动粒微管和极性微管D.星体微管和极性微管
15．“Hayflick”极限指（）
A.细胞最小分裂次数B.细胞最大分裂次数
C.细胞最适分裂次数D.细胞最大培养代数
二、判断题（本大题共10小题，每小题1分，共10分）
判断下列各题，正确的在题后括号内打“√”，错的打“×”。
16．原核细胞和真核细胞的细胞器都相同。（）
17．无论在任何情况下，细胞膜上的糖脂和糖蛋白只分布于膜的外表面。（）
18．细胞内受体的本质是激素激活的基因调控蛋白，受体结合的DNA序列是受体依赖的转录增强子。（
19．溶酶体内的pH是中性，即7.0左右。（）
20．三羧酸循环在细胞质基质中进行。（）
21．核小体的化学组成和螺线管的化学组成是一致的。（）
22．肽链合成终止时，mRNA分子的终止密码子出现在核糖体的P位。（）
23．微管的管壁是由13条原纤维组成的。（）
24．CDK激酶含有周期蛋白和CDK蛋
白，是细胞周期调控的重要因素。（）
第2页））
25．多莉羊的培育成功说明动物体细胞也是全能的。（）
三、名词解释(本大题共8小题，每小题3分，共24分)
26．电镜负染技术
27．液态镶嵌模型
28．ATP合成酶
29．染色体
30．核孔复合体结构模型
31．细胞骨架
32．细胞周期
33．编程性细胞死亡
四、论述题(本大题共4小题，每小题9分，共36分)
34．试述主动运输的特点和分类。
35．哪些蛋白质需要在内质网上合成？
36．减数分裂期Ⅰ较体细胞有丝分裂期有哪些鲜明的特点？
37．细胞在衰老过程中，其结构发生哪些深刻变化？
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