正相色谱法:根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。固定相极性大于流动相极性的情况,称为正相色谱。硅胶色谱和极性键合相色谱可作正相色谱。
正相色谱是采用极性固定相、非极性流动相的分离方法。这是一种根据分子的极性大小将其分开的液相色谱技术,因为正相色谱以吸附效应作为分离的基础,所以也称为吸附色谱。在正相色谱中,样品分子与载体基质的硅醇基团发生特异的极性相互作用,与固定相产生强极性相互作用的极性样品分子比较难被洗脱,在柱内停留比较长的时间,反之,极性较弱或非极性分子与
什么是正相色谱和液相色谱,在应用上有什么特点?
液相色谱有正相和反相之分。如果采用极性固定相和相对非极性流动相,就称为正相;如果采用相对非极性固定相和极性流动相,则称为反相。由于极性化合物更容易被极性固定相所保留,所以正相液-液色谱系统一般可用于分离极性化合物。相反,反相色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。正相色谱的流出顺序是极性小的先流出,极性大的后流出;反相色谱的流出顺序正好相反。
高效液相色谱特点:
①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。
②高效:分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
③高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。
④应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。
⑤分析速度快、载液流速快:较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。
何为正相色谱及反相色谱?在应用上有何特点?
正相色谱基本上可以看作液固吸附色谱。其柱填料为吸附剂,表面有活性吸附点。溶剂和溶质分子可以吸附在活性中心。反相色谱是流动相极性大于固定相极性的色谱。
反相色谱的应用特点:反相介质性能稳定。分离效率高,它能分离蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾体、脂类、脂肪酸、碳水化合物、生物碱等含有非极性基团的物质。
正相色谱法的应用特点:全多孔型的微球型或无定型硅胶,然而,球形硅胶更适合于有效分离。用球形硅胶填充的正相柱具有较好的渗透性、较低的操作压力和较好的稳定性。
扩展资料:
反相色谱中最常用的有机溶剂有甲醇和乙腈。此外,乙醇、四氢呋喃、异丙醇和二氧六环等常用作改性剂。有机溶剂的梯度也会影响分辨率。梯度越小,分辨率越大。
正相色谱的保留机理类似于吸附过程。极性样品分子和溶剂分子吸附在柱填料表面的极性基团(吸附剂)上。对于常用于正相的氰基、氨基或二醇基固定相柱,吸附中心通常为键合配体或硅烷。在使用硅胶时,吸附位点为硅烷醇(一SiOH)。
参考资料来源:百度百科-反相色谱
参考资料来源:百度百科-正相色谱
何为正相色谱及反相色谱?在应用上有何特点?
在液-固吸附色谱,液-液分配色谱这两种液相色谱中才涉及到正相色谱及反相色谱.液-固吸附色谱(固定相是固体吸附剂,它是根据物质在固定相是吸附作用差异来分离的.吸附作用越强,K值越大,保留时间越长)液-液分配色谱(是将固定液涂在担体上作为固定相的,它的分离原理与液液萃取的原理相同,从而服从分配定律.在固定液中溶解度大,K值大,保留时间长).
正相色谱是指流动相的极性小于固定相的极性;反正色谱是指流动相的极性大于固定相的极性.
对于反相色谱,极性越小的物质,流动相的极性越大,保留时间越长.极性越小的物质,流动相的极性越小,保留时间越短.对于极性大的物质来说,流动相的极性对其保留时间影响较小.而正相色谱正好相反.
因此在应用上正相色谱用于分离极性较大的物质,如蛋白质、生物碱等.反相色谱多用于分离极性较小的物质,在流动相的选择上,反相色谱的优势更大,在实际工作中反相色谱的应用更为广泛
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