1、将样品放入离心机转头的离心管内,离心机驱动时,样品液就随离心管做匀速圆周运动,于是就产生了一向外的离心力,由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同,在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同,由此便可以得到相互间的分离;
2、由于离心力的存在,颗粒将加速运动直到摩擦力与离心力相等,在这种情况下,颗粒所受到的净作用力为零,颗粒将以最大速度运动。
离心的种类和原理
离心方法主要有两种: 制备型 (用来分离某些颗粒)和 分析型 (用来了解分离颗粒的物理性质)。
分子或细胞生物学实验室中所作的决大多数离心机属于制备型离心机,而多数常规制备型离心是差速离心。
g 力和每分钟旋转次数(rpm) 是大略的值:取决于所用的离枣逗心机型号和转子。
差速离心(沉淀)
原理:样品在一定速度下离心,分成上清部分与沉淀部分。样品根据沉降速度不同得到分离。在一定离心力下,沉降速度与颗粒大小、颗粒与液体的密度差成比例。
缺点:沉淀块是沉降下来的所有成分的混合,而有些成分并不是你想要的。
所用转子:角式转子、外摆桶式转子。
例子:从培养基中沉淀细菌或细胞,收集沉淀的DNA 。
密度梯度离心
速率区带离心
原理:分离浮力密度相近但形状或大小不同的颗粒。样品铺陈在蔗糖梯度或其他黏性介质梯度的顶上。
由于颗粒的密度大于液体密度,所以颗粒物质最终都会沉降下来。因此,应在颗粒已经分开而所有颗粒到达管底之前就停止离心。
所用转子:外摆桶式或者专门设计的区带转子/离心机。
例子:用15% – 40 % (W / V) 蔗糖梯度分离核糖体亚基。
等密度梯度离心
原理:如同平衡密度梯度离心一样,利弯旅用浮力密度来分离颗粒分子。样品与梯度介质例如氯化铯一起混匀,产生一个与颗粒平均密度相当的密度。然后离心这一均质性悬浮液,在离心过程中形成梯度。(氯化铯略带黏性,较难用来作预制梯度。)颗粒移动到相应的浮力密度处,停止沉降。
所用转子;外摆桶式、直立式、角式。角式与直立式为优, 因为沉降距离较短,离心时间可以缩短。对于而细胞颗粒而言, 100 000 ~200 000 g 条件下需要18 ~ 72 小时。
例子;用氯化绝梯度分离质粒DNA 。
平衡密度梯度离心
原理:利用浮埋岩凳力密度而不是沉降速度来分离颗粒。平衡密度梯度离心采用预形成梯度而不是离心过程中自我形成的梯度,实际上是等密度梯度离心的变异形式。样品在一个密度比细胞或颗粒密度为高的介质密度梯度中离心,
直到形成平衡。平衡时,任一颗粒在密度梯度中移动到其密度与周围溶液的密度恰好相当的点上。
所用转子:外摆式、角式、直立式。
例子:在Ficoll 梯度上分离白细胞。
离心机工作原理?
离心机原理:
当含有细小颗粒的悬浮液静止不动时,悬浮的颗粒由于重力场而逐渐下沉。粒子越重,下沉越快,而密度低于液体的粒子会浮上来。
粒子在重力场中的运动速度与粒子的大亩宴小、形状和密度烂裂有关,还与重力场的强度和液体的粘度有关。在通常的重力作用下,可以观察到直径为几微米的红细胞大小的颗粒。
另外,当物质在介质中沉降时,伴随着扩散。扩散是无条件的,绝对的。与扩散物质的质量成反比,颗粒越小,扩散越严重。定居是相对的,有条件的饥耐闭,只能靠外力推动。
与沉降物体的重量成正比,颗粒越大,沉降越快。对于小于几微米的颗粒,如病毒或蛋白质,在溶液中处于胶体或半胶体状态,仅靠重力无法观察沉降过程。因为颗粒越小,沉降越慢,扩散现象越严重。
所以需要用离心机产生强大的离心力,迫使这些颗粒克服扩散,产生沉降运动。
离心是利用离心机转子高速旋转产生的强大离心力,加速液体中颗粒的沉降速度,分离样品中沉降系数和浮力密度不同的物质。
离心机工作原理
离心机原理:
当含有细小颗粒的悬浮液静止不动时,悬浮的颗粒由于重力场而逐渐下沉。粒子越重,下沉越快,而密度低于液体的粒子会浮上来。
粒子在重力场中的运动速度与粒子的大亩宴小、形状和密度烂裂有关,还与重力场的强度和液体的粘度有关。在通常的重力作用下,可以观察到直径为几微米的红细胞大小的颗粒。
另外,当物质在介质中沉降时,伴随着扩散。扩散是无条件的,绝对的。与扩散物质的质量成反比,颗粒越小,扩散越严重。定居是相对的,有条件的饥耐闭,只能靠外力推动。
与沉降物体的重量成正比,颗粒越大,沉降越快。对于小于几微米的颗粒,如病毒或蛋白质,在溶液中处于胶体或半胶体状态,仅靠重力无法观察沉降过程。因为颗粒越小,沉降越慢,扩散现象越严重。
所以需要用离心机产生强大的离心力,迫使这些颗粒克服扩散,产生沉降运动。
离心是利用离心机转子高速旋转产生的强大离心力,加速液体中颗粒的沉降速度,分离样品中沉降系数和浮力密度不同的物质。
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